RD-100i OSNA – die neue Generation der Sentinellymphknoten-Analyse bei Brustkrebs

RD-100i OSNA – die neue Generation der Sentinellymphknoten-Analyse bei Brustkrebs Die Sentinellymphknoten-Biopsie (SLNB) hat sich in den letzten Jahren als das operative Verfahren der Wahl bei klinisch nodal-negativen Patientinnen mit primärem Mammakarzinom etabliert. Die intraoperative Analyse des Sentinellymphknotens (SN) erfolgt üblicherweise über den Schnellschnitt oder die Imprint-Zytologie mit anschließender HE-Färbung (Hämatoxylin-Eosin). Diese histopathologischen Methoden besitzen jedoch eine eingeschränkte Sensitivität, da während der Operation nur ein geringer Teil des Lymphknotengewebes...

Fortschrittliche Technologie OSNA ist ein weitestgehend automatisierter molekularer Assay. Das Reaktionsverfahren basiert auf einer speziellen Technologie zur Amplifikation von Nukleinsäuren (RT-LAMP*) und ermöglicht die Bestimmung der Cytokeratin 19 (CK19) mRNA-Expression. CK19 ist ein Epithelzellmarker und in Lymphknotengewebe normalerweise nicht vorhanden. Die Expressionsrate der CK19 mRNA korreliert mit der Größe der metastatischen Herde. Die Auswertung der Analyseergebnisse erfolgt auf der Grundlage einer Standardkurve mit drei Kalibratoren unterschiedlicher Konzentrationen. Auswahl des...

Bei der innovativen Amplifikationstechnologie RT-LAMP handelt es sich um ein schnelles isothermes Reaktionsverfahren, das Vorzüge gegenüber konventionellen PCR-Methoden aufweist. Die Ampli- fikationsreaktion läuft in nur i6 Minuten ab und erfordert keine vorherige Aufreinigung der RNA. Die Vorgehensweise bei der Pro- benvorbereitung und das spezielle Primerdesign, zielen auf eine hohe Spezifität und die Vermeidung falsch-positiver Ergebnisse ab. Das RT-LAMP-Verfahren verwendet sechs unterschiedliche Primer. Sie sind so ausgewählt, dass eine Amplifikation von CK19-Pseudo- genen oder deren Transkripten...

Klinische Validierungsstudien und deren Ergebnisse Das OSNA-Verfahren wurde in mehreren multizentrischen Studien in verschiedenen Ländern evaluiert [1 –5]. In all diesen Studien wurde die Methode mit einer sehr ausführlichen histopathologischen Untersuchung verglichen. Dazu wurden die Lymphknoten mit einem speziellen Schneidgerät in vier Scheiben von 1 oder 2 mm Dicke geschnitten. Jeweils zwei alternierende Scheiben wurden mit OSNA analysiert, und die anderen beiden Scheiben für die histologische Begutachtung verwendet. Hierfür wurden Paraffinschnitte in fünf Stufen im Abstand von 100, 200 oder...

Gerät Methode Analyseparameter Technologie Detektionsverfahren Ergebnisparameter Durchsatz Volumen der Gewebeprobe Probevolumen Reagenzien Speicherkapazität Qualitätskontrolle Schnittstellen Genamplifikations-Detektorsystem RD-100i OSNA (One Step Nucleic Acid Amplification) CK19 mRNA RT-LAMP (Reverse transcriptase loop-mediated isothermal amplification) Trübungsmessung. Veränderung der Lichtdurchlässigkeit des Reaktionsansatzes in Abhängigkeit vom Reaktionsgrad und der gebildeten Menge des Präzipitats Magnesiumpyrophosphat CK19 Q (CK19 Qualitatives Ergebnis) CK19 (CK19 Risetime) CK19 C (CK19...